Haberler

1. gerçek zamanlı kantitatif pcr

1996 yılında, gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (gerçek zamanlı qpcr) ilk olarak amerika birleşik devletleri'nde uygulanan biyosistemler tarafından tanıtıldı. Sözde gerçek zamanlı qpcr, floresan sinyalini sürekli olarak izlemek için floresan gruplarının pcr reaksiyonuna eklenmesini ifade eder. Görünüm sırası ve sinyal gücünün değişimi, hedef genin ilk miktarını gerçek zamanlı olarak analiz etmek için kullanılabilir. Bu teknolojinin icadı, niteliksel olarak nicel pcr'ye sıçramayı gerçekleştirir.

2. pcr floresansında kullanılan kimyasallar

Şu anda, gerçek zamanlı qpcr iki kategoriye ayrılır: kullanılan farklı floresan kimyasallara göre floresan boyaları ve floresan probları.

3. pcr floresansında kullanılan boyalar

Floresan boyalara da dna bağlama boyaları denir. Şu anda kullanılan ana boya molekülü sybr yeşil i. Sybr green, özellikle çift sarmallı dna'nın küçük oluğuna bağlanabilirim. Serbest sybr yeşil neredeyse hiç floresan sinyali yok, ancak çift telli dna'ya bağlanır. Bundan sonra floresan sinyali yüzlerce kez artırılabilir. Pcr ürününün artmasıyla, pcr ürününün ve boyasının bağlanma miktarı da artar ve floresan sinyalinin yoğunluğu çift telli dna moleküllerinin sayısını temsil eder.

Floresan boyaların avantajları, kullanımı kolay, herhangi bir pcr ürünüyle birleştirilebilir ve ucuzdur.

Genel olarak, sybr green i yöntemi en temel ve yaygın olarak kullanılan gerçek zamanlı qpcr deneylerinden biridir.

4. pcr floresan için problar

The most commonly used fluorescent probes in Real-time qPCR are TaqMan probes. The basic principle is to design and synthesize a probe that can specifically hybridize to the target gene. The 5' end of the probe is labeled with a fluorophore, and the 3' end is labeled with a quencher group.

Normal şartlar altında, iki grup arasındaki uzamsal mesafe çok yakındır ve floresan geni su verme nedeniyle floresan olamaz. Pcr amplifikasyon sırasında, astar ve prob şablona aynı anda bağlanır ve probun bağlanma pozisyonu, akış yukarı ve aşağı akış primerleri arasında bulunur.

When the amplification extends to the position where the probe binds, the Taq enzyme uses the 5' exonuclease activity to cleave the fluorescent molecule attached to the 5' end of the probe from the probe, causing it to fluoresce. The number of detected fluorescent molecules is proportional to the number of PCR products, therefore, the number of initial DNA templates can be calculated according to the fluorescence intensity in the PCR reaction system.

Taqman prob teknolojisi, floresan boyaların ve spesifik olmayan amplifikasyonun kombinasyonunun problemini çözer. Reaksiyondan sonra, test süresini kısaltan erime eğrisi algılamaya gerek yoktur.

Taqman prob teknolojisinin avantajları düşük floresan arka plan, yüksek hassasiyet, yüksek hibridizasyon kararlılığı, iyi floresan spektral çözünürlük ve yüksek özgüllüktür.

Taqman problarının yüksek özgüllüğü nedeniyle, özellikle insan gen polimorfizmleri için alelik ayrımcılık için ve snp'ye dayalı suşları ayırt etmek ve ölçmek için kullanılabilir.