Ⅰ. Ⅰ PCR teknolojisi prensibi
Bu yıl, COVID-19 dünya çapında öfkeli ve herkes nükleik asit testini duymuş olmalı. Salgının çekirdek asit tespitinde, PCR floresan teknolojisi, müfettişlerin hızlı ve doğru bir şekilde COVID-19 ile enfekte olup olmadığını belirlemelerine yardımcı olabilecek merkezi bir rol oynar.
Peki PCR teknolojisi tam olarak nedir?
PCR, polimeraz zincir reaksiyonu için bir kısaltmadır. Kısacası, PCR üç temel reaksiyon adımından oluşur: yüksek sıcaklık denatürasyonu-düşük sıcaklık tavlama-orta sıcaklık uzantısı:
1. Tek telli olmak için dna'nın denatürasyonu
Şablon dna'nın belirli bir süre boyunca yaklaşık 95 ° c'ye ısıtılmasından sonra, şablon dna'nın çift iplikçiği tek bir ipliğe ayrılır, böylece astara bağlanabilir ve bir sonraki reaksiyon turuna hazırlanabilir.
2. Düşük sıcaklık tavlama
Şablon DNA tek iplikçiklere denatüre edildikten sonra, sıcaklık yaklaşık 55 ° c'ye düşürülür ve primerler şablon DNA tek iplikçiklerin tamamlayıcı dizileri ile eşleştirilir.
3. Orta sıcaklık uzantısı
Taq enziminin etkisi altında, DNA şablonu ve astar konjugatları reaksiyon hammaddesi olarak dNTP ve şablon olarak hedef dizisi kullanır. Temel eşleştirme ve yarı ayrılmış çoğaltma prensibine göre ve son olarak şablon DNA zincirine tamamlayıcı yeni bir yarı ayrılmış çoğaltma zinciri sentezleyin.
Ⅱ. Floresan PCR algılama yöntemleri
Şu anda, çin'in devlet ilaç İdaresi tarafından onaylanan COVID-19 algılama reaktiflerinin çoğu, COVID-19 tespit etmek için floresan PCR yöntemleri kullanır.
Floresan PCR yöntemi, PCR reaksiyon sistemine floresan grupları eklemeyi ifade eder. PCR amplifikasyonunun ilerlemesiyle, reaksiyon ürünleri birikmeye devam ediyor ve floresan sinyal yoğunluğu da orantılı olarak artıyor. Floresan amplifikasyon eğrisi grafiği, PCR floresan sürecinin gerçek zamanlı tespiti.
Ⅲ. PCR floresan sarf malzemeleri seçme İlkeleri
1. Malzeme
PCR genellikle PP malzemeden yapılır, çünkü PCR/qPCR sarf malzemeleri genellikle reaktifler veya numunelerle doğrudan temas halindeyken, polipropilen (PP) malzeme biyolojik olarak inert bir malzemedir. Yüzeyin biyomoleküllere yapışması kolay değildir ve iyi kimyasal direnç ve sıcaklığa sahiptir. Tolerans (121 ° c'de otoklavlanabilir ve termal bisiklet sırasında sıcaklık değişikliklerine de dayanabilir). PCR sarf malzemeleri tüm PP malzemelerdir.
2. PCR tüp/plaka hacmi
Farklı hacimlerde PCR tüpleri/plakaları nasıl seçilir?
Seçim amacı: belirli deneysel gereksinimlere göre uygun ürünü seçin. PCR tüplerinin hacmi çoğunlukla PCR reaksiyonlarının gereksinimlerini karşılayabilir. PCR tüpleri, en yaygın kullanılan iki format olan tek tüpler ve şeritler ile düşük ila orta verim PCR/qPCR deneyleri için idealdir.
Tek bir tüp, çalıştırılacak reaksiyonların tam sayısını ayarlamak için esneklik sağlar. Alternatif olarak, daha büyük reaksiyon hacimleri için tek bir 0.5mL tüp seçilebilir.
Kaplinler genellikle ayrı veya kapaklı 8 veya 12 tüplü formatta mevcuttur. Düşük ve orta verim deneyleri için tek ve çok kanallı pipetlerle uyumludur. Kapaklar ile şeritler örnek kontaminasyonu önlemek için örnek tüpleri bağımsız olarak açar ve kapatır.
3. Duvar kalınlığı
Tüp duvar kalınlığı doğrudan termal iletkenliği etkiler ve son derece ince duvar kalınlıkları ısı transferini optimize eder ve döngü süresini azaltır. Ultra ince duvarlı plastik, standart versiyondan yaklaşık % 50% daha incedir, termal bariyeri daha da azaltır ve daha hızlı ve daha sağlam bir yanıt verir. PCR sarf malzemeleri ultra ince boru duvarlarıdır.
4. Renk
PCR plakaları genellikle, özellikle yüksek verimli deneylerde, görsel farklılaşmayı ve örneklerin tanımlanmasını kolaylaştırmak için çeşitli farklı renk formatlarında mevcuttur. Sıradan PCR reaksiyonları için şeffaf veya renkli PCR tüpleri kullanmak mümkündür ve şeffaf PCR tüpleri örnek sınıflandırma yönetimi için daha yararlıdır.
Plastiğin renginin DNA amplifikasyonu üzerinde bir etkisi olmamasına rağmen, qPCR için yüksek kaliteli beyaz PCR sarf malzemeleri tavsiye edilir. QPCR floresan sinyal yoğunluğunun gerçek zamanlı kantitatif tespiti gerektirdiğinden, hassas ve doğru floresan sinyal iletimi gereklidir. Deneylere göre, geleneksel şeffaf PCR ürünleriyle karşılaştırıldığında, beyaz PCR ürünleri floresan sinyalini en büyük ölçüde yansıtabilir, alan sinyallerinin çapraz kontaminasyonunu azaltabilir, ve gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR sonuçlarını elde edin.
Floresan dedektörünün farklı pozisyon tasarımı nedeniyle farklı marka aletleri, lütfen üretici tarafından önerilen malzemelere bakın. Bio-rad CFX veya Roche 480 gerçek zamanlı PCR enstrümanı için üretici beyaz PCR plakaları kullanmanızı önerir. PCR plakası beyaz veya şeffaf olduğundan ve çeşitli özelliklere sahip olduğundan, piyasadaki ortak PCR cihazları için uygundur.
Bize e-posta: